硝酸纤维素滤膜的使用场景及方法指南

发布日期：2025-12-01      浏览次数：23

一、硝酸纤维素滤膜的基本特性与工作原理

硝酸纤维素滤膜(NC膜)是由硝酸纤维素构成的微孔滤膜，具有以下显著特性：

• ‌精确孔径控制‌：孔径偏差控制在±3%以内，0.22μm孔径规格的起泡点压力达0.36MPa
  

• ‌高蛋白结合能力‌：通过静电作用力、氢键和疏水作用与生物大分子结合，结合过程分为初始结合和长期维持两个阶段
  

• ‌亲水性‌：无需有机溶剂活化，可直接在无离子水中浸润使用6

• ‌机械特性‌：质地较脆易碎，操作需小心，不适合需要多次重复清洗的用途6

二、主要使用场景与应用领域

1. 生物医学领域

• ‌蛋白印迹(Western blot)‌：广泛使用的转移介质，对蛋白有很强的结合能力，适用于各种显色方法

• ‌核酸转移技术‌：包括Southern Blotting(DNA)和Northern Blotting(RNA)技术

• ‌体外诊断‌：作为胶体金法抗体检测试剂盒的核心耗材，用于快速检测生物大分子

• ‌微生物检测‌：0.45μm以下孔径可实现细菌过滤，微生物复活率>90%1

2. 其他应用领域

• ‌环境保护‌：用于工业废水处理和生活污水处理

• ‌能源领域‌：作为锂离子电池隔膜材料

• ‌电子电气‌：作为半导体光刻工艺中的掩模版保护膜

三、具体使用方法与操作步骤

1. 常规操作流程

1. ‌膜预处理‌：

• 剪裁合适大小的膜片(通常比凝胶大1-2mm)

• 在无离子水中浸润排出气泡，再在缓冲液中平衡5分钟

• 对于0.45μm孔径膜，通常不需要特殊活化处理

2. ‌样品转移‌：

• 按顺序组装转移装置：电极→海绵垫→滤纸→凝胶→NC膜→滤纸→海绵垫→电极

• 确保各层间无气泡，可用玻璃棒滚压排除气泡

• 电转移条件：通常100V电压，100分钟时间

3. ‌后续处理‌：

• 封闭：使用5%脱脂牛奶或BSA溶液封闭非特异性结合位点

• 孵育：依次与一抗、二抗孵育，严格控制温度和时间

• 洗涤：使用TBST液漂洗3-4次，每次10分钟

• 显色：根据检测方法选择ECL化学发光或常规显色方法

2. 特殊应用方法

• ‌斑点杂交‌：

• DNA样品100℃变性10分钟后冰浴

• 取1-5μl变性DNA点样于膜上，80℃干烤2-3小时固定

• ‌Southern Blotting‌：

• 凝胶在变性液中浸泡45分钟使dsDNA转变为ssDNA

• 用中和液中和45分钟后进行转移

四、使用注意事项

1. ‌操作注意事项‌：

• 避免折叠、划伤或沾染杂质，使用锋利洁净的工具裁剪

• 控制加样量和速度，防止样品溢出或不均匀分布

• 孵育和洗涤需严格按实验要求控制温度、时间等因素

• 环境与存储‌：

• 保存在干燥、阴凉环境中，避免受潮和高温

• 工作温度不超过60℃，适用pH范围2-11(强酸强碱不宜使用)

• 禁止接触有机溶剂(如75%以上酒精)，遇有机溶剂易膨胀溶解

2. ‌安全事项‌：

• 穿实验服并戴一次性手套操作

• 限于专业科研使用，不得用于临床诊断或治疗

• 易燃材料，需远离火源

五、与其他滤膜的比较

特性	硝酸纤维素滤膜(NC)	混合纤维素酯滤膜(MCE)	PVDF膜
‌蛋白结合能力‌	高(疏水作用)	中等	高(共价键)
‌使用便利性‌	无需甲醇活化	需70℃蒸馏水浸泡4小时	需甲醇浸泡活化
‌机械强度‌	低，易碎	中等	高，耐用
‌背景信号‌	极低	中等	较低
‌价格‌	较低	中等	较高
‌保质期‌	5年	较短	较长

‌优势总结‌：

• 使用简便，无需特殊预处理步骤

• 背景低，信噪比高，适合各种显色方法

• 对小分子蛋白